Equipo rápido de la detección del antígeno de la sangre entera, equipo casero de la prueba del antígeno 150-250ul

Con el instrumento médico del IVD para hacer el equipo rápido de neutralización de la prueba del anticuerpo SARS-CoV-2

Equipo de neutralización de la prueba de Fluerescent del anticuerpo y prueba rápida de neutralización del anticuerpo

El análisis de pseudovirus-neutralización del anticuerpo fue realizado mientras que describió previamente (5). Brevemente, las células de Vero fueron sembradas en 96 placas bien para producir una capa monomolecular a la hora de la infección. Las cantidades de Pretitrated de rVSV-SARS-Cov-2 [phCMV3-SARS-CoV-2 el punto SARS-CoV-2-pseduotyped VSV-ΔG-GFP (proteína fluorescente verde) fue generado transfecting las células de HEK293T, ATCC CRL-3216] fueron incubadas con plasma humana en serie diluida en 37°C para 1 hora antes de añadir a las capas monomoleculares de célula confluentes de Vero (ATCC CCL-81) en 96 placas bien. Las células fueron incubadas por 12 a 16 horas en 37°C en el 5% CO2.Las células entonces fueron fijadas en paraformaldehido del 4%, manchado con 1 μg/ml Hoechst, y reflejado usando un toner de CellInsight CX5 para cuantificar el número total de células que expresaban GFP. La infección fue normalizada al número medio de células infectadas con rVSV-SARS-CoV-2 incubó con plasma humana normal. El LOD fue establecido como <1:20 on="" the="" basis="" of="" plasma="" samples="" from="" a="" series="" of="" unexposed="" control="" subjects=""> 50los títulos (de la concentración inhibitoria mediana) eran calculados usando la regresión del ajuste LogIC50 del Uno-sitio en la prisma 8,0 de GraphPad.

Un análisis fluorescencia-basado alto-producción de la neutralización

Para completar el hueco para el serodiagnóstico COVID-19 y la evaluación de la vacuna, desarrollamos un análisis fluorescencia-basado que rápidamente y confiablemente mide la neutralización de un reportero SARS-CoV-2 por los anticuerpos de especímenes pacientes. El análisis fue empleado un establo mNeonGreen (mNG) SARS-CoV-2 donde el gen del mNG fue dirigido en el ORF7 del genoma viral (fig. 1a)10. La secuencia completa del mNG SARS-CoV-2 se describe en la fig. suplementaria. 1. La figura 1b representa el organigrama del análisis de la neutralización del reportero en un formato bien 96. El protocolo del análisis se detalla en métodos suplementarios. Brevemente, los sueros pacientes fueron diluidos e incubados en serie con el virus del reportero. Después de la incubación en 37°C para 1   h, las células de Vero CC-81 (pre-sembradas en una placa bien 96) fueron infectadas con las mezclas del virus/del suero en una multiplicidad de la infección (MOI) de 0,5. En la poste-infección de 16   h, las células mNG-positivas fueron cuantificadas usando un lector de la proyección de imagen del alto-contenido (fig. 1b). Debe ser observado que las células de Vero CC-81, no células de Vero E6, fueron elegidas para el mNG prueban para permitir la cuantificación exacta de células fluorescentes. Sesenta especímenes del suero COVID-19 de pacientes RT-POLIMERIZACIÓn en cadena-confirmados y 60 de muestras del suero non-COVID-19 (archivados antes de la aparición COVID-19) eran analizados usando el virus del reportero. Para los especímenes de algún COVID-19-positive, el positivo posvírico de los días RT-PCR de la colección de la muestra estaba disponible y se indica en tabla Table1.1. Después de la infección viral del reportero, las células dieron vuelta a verde en ausencia del suero (fig. 1c, del panel inferior); en cambio, la incubación del virus del reportero con el suero paciente COVID-19 disminuyó el número de células fluorescentes (el panel superior). Una curva de la respuesta a la dosis fue obtenida entre el número de células fluorescentes y el doblez del dilución del suero (fig. 1d y fig. suplementaria. 2), que permitió la determinación del doblez del dilución que neutralizó el 50% de las células fluorescentes (NT50). El análisis del reportero diagnosticó rápidamente 120 especímenes dentro de 24   h: los 60 sueros COVID-19 (especímenes 1-60) mostraron NT positivo50de 35 a 5711, y de los 60 sueros non-COVID-19 (especímenes 61-120) mostró NT negativo50de <20>1).

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